细胞培养——无菌操作技术
在我们生活的环境中微生物可以说是无处不在,而微生物实验,特别是各类动植物细胞培养,当我们的样本被某种其他微生物沾染,发现的早或许还有补救,但操作起来也比较繁琐,并且处理过程还需要避免二次污染,这操作难度可想而知了。倘若发现的稍微晚了一些,该样本就只能尸骨无存了,作废处理。
因此对于细胞培养成功操作最基本的要点是:任何与细胞接触的物品必须是无菌的。无菌技术在理论上是很简单的:阻止无菌的、未被污染的物质或物品与任何有菌的、被污染的物体相接触。任何直接或间接地与培养相接触的物品必须无菌。理想化的情况是所有无菌操作都应该在一个层流式超净台中进行。
保证无菌操作中需用到的洗手液、75%乙醇、95%乙醇、实验室工作服、手术用乳胶手套。
无菌操作前用洗手液充分刷洗手。不同的需求选择适当的实验工作服。为保证无菌条件,穿好实验服,戴乳胶手套后还需在实验开始前以及无菌操作过程中,还应经常地用75%酒精消毒戴着手套的双手。 实验完成后脱掉防护手套后彻底冲洗双手。 细胞培养实验中样品处理的全过程都应该在一个洁净的工作间内进行。层流式洁净间为无菌操作提供了一个最适的可控制环境。对将参与无菌操作的各种物品的工作区域要进行清洁。 使用前后要用75%乙醇、紫外辐射或其他途径处理工作面。 无论怎样,当所用物品介入洁净工作间时都要用消毒剂处理。按照从洁净到污物的顺序合理安排各种物品,以防污染物件对清洁物件的交叉污染。任何细小的污染物应立即投入到消毒盘内。 无菌工作完成后,及时清理各种较大的污物或其他要想处理的废弃物,并放置在指定的包装袋或盘内,然后高压灭菌。 与相关物品接触的器械的关键部分浸泡于95%乙醇中。从乙醇中小心取出器械时,切勿碰触其洁净部位。待乙醇自然挥发后,持器械在喷灯火焰上通过,去除残留的乙醇。 器械使用前,切勿碰触任何未经消毒的物件,冷却10s 后再用。
警告: 1 75%、95%乙醇都是是易燃品,乙醇容器要置于一定范围的安全处而远离明火。 2 器械使用完毕后重新浸泡在乙醇消毒剂中,以备使用。 3 手握接种环柄,于中间部位开始在酒精灯火焰上前后移动烧灼金属圈,直至出现橘红色,然后冷却至室温(约10s) ,待用。 4 完成接种后,重新烧灼接种圈,清除残余的生物活性物质。冷却至室温,放置备用。