免疫学三大工具—免疫组化（IHC）
免疫组化是利用抗原与抗体的特异性结合，通过免疫反应和显色反应来准确定位组织和细胞中的抗原，从而进行形态与功能结合的研究，对于病理学领域具有十分重要的意义。
流程
实验步骤
1
切片
将包埋好的组织置于石蜡切片机上进行切片，石蜡切片厚度5 μm，切好的组织置于40℃水中展平，随后用玻片捞出，置于烘箱60℃，烤片30min。
注意：对骨或者皮肤这些易脱片的组织，可适当延长烤片的时间。
2
脱蜡至水
目的：为了脱去组织石蜡，让组织水化，易于孵育。
将玻片连同架子依次放入二甲苯、酒精中进行脱蜡，二甲苯脱蜡三缸，每缸10min。100%，85%，70% 酒精依次浸泡10min。
注意：可根据气温适当延长或缩短时间。
3
抗原修复
目的：使抗原位点暴露出来
材料：柠檬酸缓冲液
清水冲洗玻片，然后连同架子放入柠檬酸缓冲液中，在微波炉中煮沸，然后室温冷却。
4
封闭
目的：封闭非特异性结合位点
材料：免疫组化笔
室温冷却后将柠檬酸倒掉，并在染色缸中用PSB清洗玻片。用免疫组化笔在玻片上画圈防止试剂流出，滴加封闭血清，于恒温箱中37℃孵育30min。
5
一抗二抗孵育
材料：PBS缓冲液
将载玻片取出，倒去血清，滴加一抗，4℃冰箱保存过夜。取出后用PBS清洗玻片。然后同样操作依次滴加二抗、SABC、显色剂、并每次用PBS洗涤玻片。
6
复染
材料：苏木素染色液
取玻片浸泡于苏木素染色液中，一般动物组织染30s，植物组织染3-5min，蒸馏水水洗，1%盐酸酒精中脱色，浸泡水洗。
注意：具体复染时间根据染色效果进行调整。
7
脱水
将复染结束的玻片依次浸泡于70%，85%，100%酒精中梯度脱水，每缸3min；二甲苯三缸，每缸2min。
8
封片
材料：中性树脂
最后中性树脂滴在玻片组织旁进行封片，通风橱晾干，观察实验结果及拍照。
