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核酸提取—瓷珠法

核酸是生物界一类非常重要的生物大分子。它在生物繁殖、发育、维持、衰老和死亡等所有生命活动中发挥着重要作用。目前,核酸已成为生物化学、遗传学等生命相关学科的研究热点。核酸研究的首要前提是能够将其从众多复杂的生物大分子中提取出来,并进行一定程度的纯化,以供相应的科学研究和实际应用。




实验原理




在带电荷的盐离子(如Na+)的作用下,带负电荷的磷酸基团在解离的盐离子和羧基之间形成离子桥,使DNA特异性地吸附在羧基磁珠表面。在去除PEG和盐后,添加水性分子将快速充分地水化DNA,解除三者之间的离子相互作用,使吸附在磁珠上的DNA被提取出来。




实验步骤






01

配置蛋白酶K溶液

按照配置比例在一定量蛋白酶K干粉中加入一定量的去离子水,然后进行瞬时离心或者反复摇晃震荡使其完全溶解。短期使用可于4℃保存,长期储存需置于-20℃。



02

样本裂解

使用移液枪将样本加入离心管中,并且加入裂解缓冲液以及蛋白酶K溶液。然后再加入结合缓冲液,其中包含了磁珠用于吸附DNA。反复震荡混匀,使样本裂解且DNA结合在磁珠上。



03

磁铁吸附

将离心管放置在磁力架上,使磁珠被磁铁吸附到离心管的管壁上,然后用移液枪吸附上清并弃去,保留磁珠。



04

洗脱DNA

用移液枪在离心管中加入洗涤缓冲液,并且反复摇晃震荡使磁珠重新悬浮,然后将离心管放置在磁力架上,吸附磁铁,吸取上清并弃去。重复洗涤两次,用移液枪移取上清液于另一离心管中,此时上清液里即为DNA。



05

其他提取法

以上操作为手动提取,除此之外还可以选择使用核酸提取仪进行DNA提取。大致操作步骤为:将第2步中经过裂解缓冲液以及蛋白酶K溶液处理过的样本加入深孔板当中,然后将深孔板放进提取仪,配合磁棒套自动完成DNA提取过程。


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